پایان نامه بررسی تاثیر بیماری مولتیپل اسکلروزیس ( M.S ) بر اسپرماتوژنز و هورمونهای جنسی رتهای نژاد و

 پایان نامه بررسی تاثیر بیماری مولتیپل اسکلروزیس ( M.S ) بر اسپرماتوژنز و هورمونهای جنسی رتهای نژاد ویستار ( Wistar ) در word دارای 92 صفحه می باشد و دارای تنظیمات و فهرست کامل در microsoft word می باشد و آماده پرینت یا چاپ است

فایل ورد پایان نامه بررسی تاثیر بیماری مولتیپل اسکلروزیس ( M.S ) بر اسپرماتوژنز و هورمونهای جنسی رتهای نژاد ویستار ( Wistar ) در word  کاملا فرمت بندی و تنظیم شده در استاندارد دانشگاه  و مراکز دولتی می باشد.

این پروژه توسط مرکز مرکز پروژه های دانشجویی آماده و تنظیم شده است

توجه : توضیحات زیر بخشی از متن اصلی می باشد که بدون قالب و فرمت بندی کپی شده است

بخشی از فهرست مطالب پروژه پایان نامه بررسی تاثیر بیماری مولتیپل اسکلروزیس ( M.S ) بر اسپرماتوژنز و هورمونهای جنسی رتهای نژاد ویستار ( Wistar ) در word

چکیده 
فصل اول ـ مقدمه
1ـ1ـ بافت شناسی دستگاه عصبی 
1ـ1ـ1ـ آستروسیتها 
2ـ1ـ1ـ الیگودندروسیتها 
3ـ1ـ1ـ میکروگلیا  
4ـ1ـ1ـ سلولهای آپاندیمی 
5ـ1ـ1ـ تنظیم مولکولی تکامل سلولهای عصبی 
2ـ1ـ ساختار میلین 
1ـ 2 ـ 1 مکانیسم میلین سازی در سیستم عصبی مرکزی 
3 ـ 1 بیماری مولتیپل اسکلروزیس multiple sclerosis  
1ـ3ـ1تاریخچه 
2ـ3ـ1ـ تعریف 
3ـ3ـ1ـ دمیلینه شدن (از دست رفتن میلین) 
4ـ3ـ1ـ شیوع (prevalence) 
5ـ3ـ1ـ بروز (incidince) 
6ـ3ـ1ـ پاتولوژی MS  
4ـ1ـ اتیولوژی MS  
1ـ4ـ1 عوامل محیطی 
2ـ4ـ1 عوامل ژنتیکی  

3ـ4ـ1 فرضیه خود ایمنی 
5ـ1ـ MS و هورمونهای جنسی 
6ـ1ـ  MSو تولید مثل  
7ـ1ـ اتیدیوم بروماید 
1ـ7ـ1ـ مکانیسم عمل اتیدیوم بروماید  
8 ـ1ـ اسپرماتوژنز 
1ـ8ـ1ـ طول دوره اسپرماتوژنز در رت  
9ـ1ـ هورمونهای موثر در اسپرماتوژنز 
1ـ 9ـ1ـ آندروژنها و بیوسنتز آنها  
2ـ9ـ1ـ هورمونهای پروتئینی  
1ـ2ـ9ـ1ـ GnRH 
2ـ2ـ9ـ1ـ FSH 
3ـ2ـ9ـ1ـ LH 
4ـ2ـ9ـ1ـ inhibin و Activin   
10 ـ1ـ تنظیم هورمونی اسپرماتوژنز  
فصل دوم ـ مواد و روشها
1ـ2ـ مواد مورد نیاز 
2ـ2ـ وسایل مورد نیاز 
3ـ2ـ چگونگی تهیه محلول اتیدیوم بروماید 
4ـ2ـ حیوان آزمایشگاهی و دلایل انتخاب آنها 
5ـ2ـ مواد مورد نیاز و طرز ساخت محیط T6    
6 ـ 2 طرح کلی پروژه تحقیقاتی  

1ـ6ـ2ـ روش جراحی جهت تزریق محلول اتیدیوم بروماید و سالین به داخل مغز  
2ـ6ـ2ـ تشریح موشها و خون گیری 
3ـ6ـ2ـ جداسازی سرم  
4ـ6ـ2ـ سنجش هورمونهای LH و FSH و تستوسترون  
5ـ6ـ2ـ آسپیره نمودن اسپرم از ناحیه اپیدیدیم و خارج نمودن بیضه‌ها  
6ـ6ـ2ـ فیکس کردن نمونه ها و آبگیری 
7ـ6ـ2ـ الکل گیری و نفوذ دادن پارافین 
8ـ6ـ2ـ قالب گیری نمونه ها 
9ـ6 ـ2 برش برداری  
10ـ6 ـ2 پهن کردن نوارهای پارافینی روی لام  
11ـ6 ـ2 رنگ آمیزی 
7ـ2ـ بررسی میکروسکوپیک مقاطع بافتی از ماده سفید مغز 
8ـ2ـ بررسی میکروسکوپی مقاطع بافتی بیضه ها  
9ـ2ـ مطالعه مورفولوژی و تحرک اسپرم از ناحیه اپیدیدیم 
10ـ2ـ تحلیل آماری و نتایج و رسم هیستوگرامها 
فصل سوم ـ نتایج
1ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر اتیدیوم بروماید بر بافت عصبی 
2ـ3ـ نتایج حاصل از بررسی مورفولوژی و تحرک اسپرمها در ناحیه اپیدیدیم 
1ـ2ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر درصد اسپرمهای پیشرونده 
2ـ2ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر درصد اسپرمهای درجا 
3ـ2ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر درصد اسپرمهای بی‌تحرک 
4ـ2ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر مورفولوژی طبیعی اسپرم 

5ـ2ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای گرد (Round cells)‌ در مایع اسپرمی ناحیه اپیدیدیم 
3ـ3ـ نتایج حاصل از سنجشهای هورمونی 
1ـ3ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر غلظت FSH سرم خون 
2ـ3ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر غلظت LH سرم خون 
3ـ3ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر غلظت تستوسترون سرم خون 
4ـ3ـ نتایج حاصل از مطالعات مورفولوژی و شمارش سلولی 
1ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر قطر لوله‌های اسپرم‌ساز 
2ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای اسپرماتوگونی نوع A 
3ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای اسپرماتوگونی نوع B 
4ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای اسپرماتوسیت اولیه 
5ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای اسپرماتید 
6ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای اسپرماتوزوئید 
7ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای سرتولی 
8ـ4ـ3ـ نتایج حاصل از تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای لایدیگ 
فصل چهارم ـ بحث و تفسیر
1ـ4ـ انتخاب روش و دوره تأثیر بیماری بر حیوان 
2ـ4ـ تأثیر بیماری MS بر درصد تحرک اسپرمها و درصد اسپرمهای نرمال در ناحیه اپیدیدیم 
3ـ4ـ تأثیر بیماری MS بر تعداد سلولهای گرد (Round cells) در اپیدیدیم 
4ـ4ـ تأثیر بیماری MS بر قطر لوله‌های اسپرم ساز و مراحل اسپرماتوژنز 
5ـ4ـ تأثیر بیماری MS بر سلولهای سرتولی 
6ـ4ـ تأثیر بیماری MS بر سلولهای اسپرماتوزوئید 

7ـ4ـ تأثیر بیماری MS بر سلولهای لایدیگ و هورمونهای تستوسترون، LH و FSH 
نتیجه گیری کلی  
پیشنهادات 
فهرست منابع فارسی  

بخشی از منابع و مراجع پروژه پایان نامه بررسی تاثیر بیماری مولتیپل اسکلروزیس ( M.S ) بر اسپرماتوژنز و هورمونهای جنسی رتهای نژاد ویستار ( Wistar ) در word

1ـ  اعتمادی‌فر، مسعود.، اشتری، فرشته (1381): تشخیص و درمان مولتیپل اسکلروز
2ـ  پریور، کاظم.، آقایی، فلور (1375): بررسی نتایج حاصل از تزریق اسپرم بی‌تحرک در سیتوپلاسم تخمک انسان از نظر باروری و کیفیت جنین‌های حاصله. دانشگاه آزاد اسلامی
3ـ  پریور، کاظم.، محسنی کوچصفهانی، هما (1372): اطلس جنین‌شناسی و جنین شناسی تجربی انتشارات جهاد دانشگاهی، دانشگاه تربیت معلم تهران
4ـ  جان کوئیرا، لوئیز سی (1368) : بافت شناسی پایه. ترجمه مهران شارقی و محمد ریاضی، انتشارات نشر کتب دانشگاهی
5ـ  رستمی، پروین.، نورجاه، پروانه (1378) : فیزیولوژی اعصاب و غدد درون‌ریز (دستگاه‌های ارتباطی) ـ انتشارات اطلاعات
6ـ  سادلر، ترجمه ماندانا اعرابی، فربد رئیس‌زاده (1379): جنین شناسی پزشکی لانگمن
7ـ  سلطان زاده , اکبر ( 1376 ) : بیماریهای مغز و اعصاب و عضلات
8ـ  سلیمانی، داریوش (1363) : بیماری مغز و اعصاب
9ـ  شهبازی، پرویز.، ملک‌نیا، ناصر (1373): بیوشیمی عمومی ـ انتشارات دانشگاه تهران
10ـ  عریان، شهربانو (1373): تولید مثل از دیدگاه‌های پزشکی و بیولوژی، موسسه انتشارات جهاد دانشگاهی (ماجد)
11ـ  فرید حسینی , رضا ( 1369 ) : ایمونولوژی , انتشارات آستان قدس رضوی
12ـ  محسنی کوچصفهانی، هما.، پریور، کاظم (1378) : روشهای فنی بافت‌شناسی، جنین شناسی و جانور شناسی انتشارات الحسین
13ـ  هاریسون، ترجمه دکتر مسعود دارا (1994): بیماری مغز و اعصاب

چکیده

      مولتیپل اسکلروزیس (M.S) بیماری سیستم عصبی مرکزی است که در آن میلین رشته‌های عصبی دچار تخریب می‌گردد. الگوی آزمایشگاهی این بیماری انسفالومیلیت آلرژیک تجربی (EAE) می‌باشد که می‌توان با تزریق ماده شیمیایی نظیر اتیدیوم بروماید در حیوان آزمایشگاهی ایجاد کرد. از جمله علائم مطرح در مردان مبتلا به بیماری MS کاهش میل جنسی و یا ناتوانی جنسی است که می‌تواند پتانسیل باروری آنها را تحت‌الشعاع خود قرار دهد. تحقیق حاضر به منظور بررسی تاثیر بیماری MS بر روی سلولهای اسپرماتوژنیک و هورمونهای جنسی رتهای نژاد ویستار انجام شده است. تعداد 36 سر رت با سن تقریبی 5 هفته به سه گروه  1)کنترل 2) شم    3) تجربی تقسیم‌ بندی شدند. بطوریکه هیچ عمل جراحی بر روی حیوانات گروه کنترل انجام نگرفت. مقدار 20 میکرولیتر از حلال سالین به داخل C.S.F در ناحیه Cerebellomedullary cistern به هر یک از رتهای گروه شم تزریق گردید. به حیوانات گروه تجربی مقدار 20 میکرولیتر از محلول اتیدیوم بروماید (mg 15 اتیدیوم بروماید در یک میلی لیتر سالین) تزریق گردید. یک هفته بعد از شروع آزمایش 2 سر رت از هر گروه جهت مطالعه ساختار بافتی ماده سفید و ساقه مغز ( Pons ) تشریح شدند، سپس بقیه حیوانات بعد از پایان یک دوره کامل اسپرماتوژنز تشریح و اعمالی نظیر خونگیری جهت آنالیز هورمونهای FSH، LH و تستوسترون، تهیه اسپرم از ناحیه اپیدیدیم جهت بررسی وضعیت پارامترهای اسپرم و همچنین تهیه نمونه بافتی از بیضه جهت مطالعه میکروسکوپی سلولهای اسپرماتوژنیک انجام گرفت. در ناحیه اپیدیدیم نتایج نشان داد که درصد تحرک پیشرونده اسپرم از حد 16/24/74 در گروه کنترل به 40/161/60 در گروه تجربی کاهش معنی‌داری (001/0p<) یافته بود. تعداد سلولهای گرد ناحیه اپیدیدیم از حد 097/073/0 در گروه کنترل به 254/015/2 در گروه تجربی افزایش معنی‌داری (001/0p<) یافته بود. همچنین درصد اسپرمهای نرمال گروه تجربی نسبت به گروه کنترل کاهش معنی‌داری نشان داد. تغییراتی در سلولهای اسپرماتوژنیک مشاهده شده بود بطوریکه سلولهای اسپرماتوگونی نوع A و B، اسپرماتوسیت اولیه و اسپرماتید در گروه تجربی در مقایسه با گروه شم و کنترل کاهش یافته ولی از نظر آماری معنی‌دار نبودند. اما تعداد سلولهای اسپرماتوزوئیدو لایدیگ در گروه تجربی بطور معنی‌داری (05/0p<) نسبت به گروه کنترل کاهش یافته بود. همچنین کاهش هورمونهای LH و تستوسترون و افزایش هورمون FSH در گروه تجربی نسبت به گروه کنترل و شم مشاهده شد. بطور کلی نتایج نشان داد که ایجاد بیماری MS در رت موجب اختلال در وضعیت سلولهای اسپرماتوژنیک و تحرک اسپرم و هورمونهای جنسی می‌شود که ممکن است پتانسیل باروری را در حیوان آزمایشگاهی تحت تاثیر خود قرار دهد

واژه‌های کلیدی: اتیدیوم بروماید، مولتیپل اسکلروزیس، Demyelination، اسپرماتوژنز، انسفالومیلیت آلرژیک تجربی (EAE)

1ـ1ـ بافت شناسی دستگاه عصبی مرکزی (CNS)

      از نظر ساختمانی، بافت عصبی از دو گروه سلول تشکیل می شود: سلولهای عصبی یا نورونها که دارای استطاله‌های بلند و متعددی هستند و چندین نوع سلول گلیال[1] یا نوروگلی[2] که نورونها را تقویت و محافظت کرده و در فعالیتهای عصبی، تغذیه عصبی و فرآیندهای دفاعی دستگاه عصبی مرکزی شرکت می‌جویند. بین انواع متعدد نوروگلی‌ها، اختلاف مورفولوژیک و عملکردی به چشم می‌خورد که در شکل 1ـ1 نشان داده شده است. انواع متعدد نوروگلی‌ها عبارتند از آستروسیتها[3]، الیگودندروسیت‌ها[4]، میکروگلی‌ها[5] و سلولهای اپاندیمی[6] (Ling et al,1973 )

1ـ1ـ1 : آستروسیت‌ها

      بزرگترین نوروگلی ها هستند و استطاله‌های بلند و فراوانی دارند این سلولها دارای هسته‌ای کروی، مرکزی و کمرنگ هستند. بعد از اتمام تشکیل نوروبلاستها، گلیابلاست‌ها از سلولهای نورو اپی‌تلیال تشکیل می‌شوند سپس از لایه نورو اپی‌تلیال به لایه‌های پوشاننده و حاشیه‌ای مهاجرت می‌کنند در لایه پوشاننده، این سلولها در اثر تمایز به آستروسیت‌های پروتوپلاسمی و آستروسیتهای رشته‌ای تبدیل می‌شوند. آستروسیت‌های پروتوپلاسمی در ماده خاکستری مغز ‌و طناب نخاعی یافت می‌شود و آستروسیت‌های رشته‌ای عمدتاً در ماده سفید وجود دارد

آستروسیت‌ها سلولهای ستاره‌ای شکلند که به وسیله زایده های پنجه‌ای[7] با رگهای خونی مغز ارتباط دارند این سلولها علاوه بر محافظت از سلولهای مغز در ایجاد سد خونی مغزی که مانع گذشتن مواد نامطلوب خون به مغز می‌شود شرکت دارند (Ling et al,1973;Peters et al,1976)

2ـ1ـ1: الیگودندروسیت ها

      نوع دیگری از سلولهای پشتیبان که احتمالاً از گلیابلاستها مشتق می شوند سلولهای الیگودندروسیتها هستند. الیگودندروسیت ها از آستروسیت ها بسیار کوچکترند و استطاله های آنها نیز کمتر و کوتاهتر از سایر نوروگلی ها است هسته این سلولها کوچکتر و پررنگتر از هسته آستروسیتها می باشد الیگودندروسیت ها هم در ماده خاکستری و هم در ماده سفید یافت می شوند. الیگودندروسیتها به صورت ساتالیت ها در گرد جسم سلولی نورون ها ظاهر میشوند و در میلینه کردن فیبر عصبی در ماده سفید سیستم عصبی مرکزی دخالت دارند و از نظر عملکرد همانند سلولهای شوان اعصاب محیطی هستند با این تفاوت که آنها می توانند در میلینه کردن بیش از یک اکسون شرکت جویند ( Bunge , 1968 ;Martin et al ,1992 )  دربیماریهایی مثل M.S این سلولها هدف سلولهای ایمنی بدن قرار می گیرند و چون ترمیم این سلولها دیر صورت میگیرد یا تقسیم انجام نمی دهند پلاکهای MS تشکیل می گردد ( اعتمادی فر 1381 )

3ـ1ـ1ـ میکروگلیا

      در نیمه دوم تکامل جنین انسان نوع سومی از سلولهای پشتیبان به نام سلول میکروگلیال در دستگاه عصبی مرکزی تشکیل می شود این سلول دارای قدرت بیگانه خواری زیادی است و از مزانشیم به وجود می آید. ( سادلر 1379) هسته این سلولها به موازات محور تنه سلولی کشیده شده است ولی سایر نوروگلی‌ها هسته‌ای کروی دارند. میکروگلی‌ها استطاله‌های کوتاهی دارند که توسط برجستگی‌هایی پوشیده می‌شود و به آنها ظاهر خاردار می‌دهد میکروگلی‌ها فراوان نیستند ولی در ماده سفید و خاکستری یافت می‌شوند. این سلولها فرمی از ماکروفاژ هستند که بعد از آسیب سیستم عصبی نقشی در فاگوسیتوز دارند. ( Peters et al, 1976 )

4ـ1ـ1: سلولهای اپاندیمی

      هنگامیکه تشکیل نوروبلاستها از سلولهای نورو اپی‌تلیال تمام می شود سلولهای نورو اپی تلیال به سلولهای آپاندیمال تبدیل می‌شوند این سلولها سطح داخلی کانال مرکزی نخاع و همچنین حفره‌های مغز را می‌پوشاند و در ترشح CSF نقش دارند. ( سادلر 1379  )

شکل 1ـ1: سلولهای نوروگلی ( جان کوئیرا  1368 )

5ـ1ـ1: تنظیم مولکولی تکامل سلولهای عصبی

      سلولهای پایه عصبی[8]  (NSC) موجود در نورواپی تلیوم در زمانهای خاصی از رشد نمو جنین رت تکثیر می یابند و به سلولهای تخصص یافته عصبی تمایز می‌یابند بطوریکه در روزهای 12ـ10 از رشد و نمو جنینی سلولهای پایه عصبی در ناحیه [9]VZ به فاکتور رشد میتوژنیک        [10] FGF₂ پاسخ می دهند و تکثیر می یابند. که ابتدا منجر به تولید نورونهای مهاجر[11] و سپس در اثر فاکتور رشد نوروتروفینها[12]  به نورونهای بالغ تمایز می‌یابند ( Rogister et al ,1999 )

      در جنین 15 یا 16 روزه سلولهای پایه در ناحیه[13]SVZ  به EGF حساس می شوند .           ] EGF (فاکتور رشد اپی‌درمی) یک پلی پپتید به وزن 6045 دالتون است که باعث تحریک تقسیم سلولی از طریق باند شدن به گیرنده‌های تیروزین کینازی بخصوصی در سطح غشاء سلول می شود و فعالیت تیروزین کیناز رسپتور را افزایش می‌دهد[ سپس با کمک هورمونهای تیروئیدی سبب تشکیل پیش‌سازهای گلیال[14] خواهد شد. پیش‌سازهای گلیال بطرف ماده سفید و کورتکس مهاجرت می‌کنند و در جنین 17ـ18 روزه تحت یکسری فاکتورهای رشد میتوژنی                    [15]EGF+FGF₂+PDGFو همچنین فاکتورهای القایی[16] BMP_2/4 و[17] CNTF آستروسیتها را تولید می کند (Rogister et al ,1999 )

      پیش سازهای گلیال در روزهای 21ـ19 از رشد و نمو جنینی سلولهای[18] OP یا سلولهای الیگودندروسیت تیپ 2 آستروسیت (0-2 A) تولید می کند. این سلولها همزمان تمایز نمی‌یابند تعدادی از این سلولها در اثر فاکتورهای رشد PDGF،[19] IGF-1(فاکتور رشد شبه انسولینی ) و هورمونهای تیروئیدی تکثیر و تمایز یافته و به سلولهای الیگودندروسیت که سازنده میلین در سیستم عصبی مرکزی هستند تبدیل می شوند. تعدادی دیگر از سلولهای OP بصورت تمایز نیافته و به فرم Adult در آمده و در زمان خاصی از رشد و نمو در اثر فاکتورهای رشد میتوژنیک FGF+ PDGF ،[20] GGF+ PDGF به فرم neonatal  در آمده و با کمک فاکتورهای القایی T₃ و IGF-1 به سلولهای الیگودندروسیت تمایز می‌یابد (شکل 1ـ2)

      آهنگ این تمایز نسبت به حالت قبلی کندتر انجام می پذیرد. کنترل تمایز توسط رسپتور Notch که بر روی سلولهای OP مستقر است صورت می‌گیرد تحریک شدن این گیرنده تمایز سلولهای OP را به سلولهای الیگودندروسیت مهار می کند. به نظر می‌رسد الیگودندروسیتهای تمایز یافته خود اثر مهاری روی سلولهای OP دارند و از تکثیر و تمایز آنها جلوگیری می کنند این عمل بوسیله بیان ژن jagged موجود در سلولهای الیگودندروسیت  صورت می گیرد وقتی که میزان بیان ژن jagged در سطح پایین باشد رسپتورهای Notch موجود در سطح سلولهای OP تحریک نمی گردند و این سلولها با حضور فاکتورهای القایی به سلولهای الیگودندروسیت تمایز می یابند. مکانیسم این عمل بطور دقیق شناخته نشده است . (Register et al ,1999 )

      Rogister و همکاران در سال 1999 گزارش دادند که جهت تحریک سلولهای پایه سازنده OP در نخاع پروتئین [21] shhضروری است این پروتئین از نوتوکورد ترشح می‌شود ولی در مغز پروتئین shh از صفحه پروکوردال تولید می شود . (Rachel et al ,2000  )

در موشهای جهش یافته که نوتوکورد از دست داده اند هیچ الیگودندروسیتی رشد نمی‌یابد. آنتی بادیهایی که shh را در محیط in vivo از بین می‌برند می‌توانند جلوی پدیدار شدن OP در نخاع را بگیرند. (Rogister et al , 1999 )